森慎太郎_形質転換 の履歴(No.1)

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  • 1 (2010-05-20 (木) 02:44:48)

動画一覧

309049 森慎太郎さんのデータより

形質転換†

形質転換　説明1†

形質転換（けいしつてんかん）は分子生物学において二つの意味をもつ。

外部からDNAを導入し、その遺伝的性質を変えること。またその操作。

正常な細胞が無制限に分裂を行うようになる、つまりガン化すること。

形質転換 (1) は、1928年フレデリック・グリフィス（en:Frederick Griffith）によって肺炎双球菌に対する実験（グリフィスの実験）により発見された。自然界において普通に起こりうる形質転換 (1) は実験室内においては人為的に作成される。



大腸菌に対する形質転換としては、電気パルスにより瞬間的に細胞に穴を開けるエレクトロポレーション法や、カルシウム法によってコンピテントセルとした菌を用いる方法がある。通常はファージ、プラスミドなどのベクターを用いて外来遺伝子を導入する。動物細胞に対してはエレクトロポレーション法、糸状菌などに対してはプロトプラスト-PEG法やエレクトロポレーション法、植物細胞に対してはアグロバクテリウムを使用する方法、酵母に対してはLi法などがよく使用される。また、この他にもBiolistic法やパーティクル・ガン法などもある。



これらの形質転換法は、生物学の研究にとって欠かすことのできないツールである。この形質転換法の開発によって、現在のバイオテクノロジーの発展があった。



応用としては発現誘導プロモーターを用いた転換、ジーントラップ法、エンハンサートラップ法、アクティベーションタギング法などが挙げられる。

http://ja.wikipedia.org/wiki/%E5%BD%A2%E8%B3%AA%E8%BB%A2%E6%8F%9B

形質転換　説明2†

液体窒素中に保存していたコンピテントセルを取り出し,室温水あるいは手のひらの中で融解後,氷水中に移す.

15ml容のプラスチックチュープ(j)に100－200ulのコンビテントセルを移し,1～20ulのDNAサンプルを加え(k-1,k-2),さら氷水中にて30分間冷却する.

42℃恒温水槽中に30秒間保持した後,氷水中に戻し2分間冷却する.

～800ulのSOC培地を加え,約1時間振漫する(l).

LB　Top Agarを電子レンジ等で溶解した後,3mlずつ小試験管に分注し,50℃に保温しておく.

3mlのLB　Top Agarに適当量のコンピテントセル培養液を加え,撹拌後LBプレート(薬剤を含む)に拡げる(m).

室温にて放置し,LB　Top Agar固化後,37℃にて一夜培養する

http://homepage1.nifty.com/genomic_art/protocols/competent/sousa.htm

動画†

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

話はすべて英語だが下に説明文などがかいてあり翻訳サイトなだを使って訳すことができる内容で、さまざまな形質転換（transformation）についての動画が掲載されている。

画像†

画像ファイル添付すること

ページ作成者 nakaizumi