岩熊　宏和_Lowry法 の履歴(No.1)

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  • 1 (2010-05-06 (木) 01:58:01)

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309008 岩熊　宏和さんのデータより†

Lowry法†

Lowry法　説明1†

ビウレット反応（2価銅イオンとペプチド結合の反応）とアミノ酸側鎖の酸化反応とを組み合わせたものである。タンパク質濃度が0.01から1.0mg/mlの範囲に適している。

タンパク質溶液にアルカリ性条件で硫酸銅、次いでフォリン-チオカルトー試薬（Folin-Ciocalteu reagent）を加えて反応させ、750nm吸光度（眼には青藍色に見える）を測定する。フォリン-チオカルトー試薬はタングステン酸、モリブデン酸、リン酸等から作られ、フェノールの検出にも用いられるのでフェノール試薬ともいう。芳香族アミノ酸（トリプトファンとチロシン）およびシステインとの反応によりホスホタングステン酸・ホスホモリブデン酸が還元され、750nm付近に吸収を生じる。この吸収波長はビウレット反応生成物にも近く、ビウレット法単独より感度が100倍ほど高くなっている。

操作は容易なので、紫外吸収法やブラッドフォード法とならびよく使われる。ただし反応に時間がかかる、タンパク質の種類（アミノ酸組成）により感度が異なる、遊離アミノ酸・フェノール類・還元剤・EDTAなどにより妨害されるといった欠点がある。これをもとに改良した方法としてビシンコニン酸法（BCA法）なども用いられている。



http://ja.wikipedia.org/wiki/%E3%83%AD%E3%83%BC%E3%83%AA%E3%83%BC%E6%B3%95

Lowry法　説明2†

ビューレット試薬に加えて、チロシン・トリプトファン・システインの側鎖と反応するFolin-Chiocalteuフェノール試薬を反応させ、その吸収ピークを測定します。

一般的に多く利用されていますが、操作に時間を要します。界面活性剤、EDTA、還元剤は定量を阻害します。

測定波長： 750 nm

【定量範囲】

1 ～ 100 µg

http://www.gelifesciences.co.jp/technologies/protein_preparation/quant.asp

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ページ作成者 nakaizumi